(3)取这11株细菌的纯培养物分别进行生化试验,结果这11株细菌均能产生吲哚;M.R.试验阳性;VP试验阴性;不利用枸橼酸盐;不产生硫化氢;能发酵乳糖、麦芽糖、葡萄糖、产酸产气;能发酵甘露醇,产酸不产气;不发酵蔗糖;不液化明胶;不水解尿素酶;能还原硝酸盐。初步鉴定为大肠埃希氏杆菌。
(4)取经生化鉴定的纯培养物,接种于肉汤培养基中,37℃培养18~20h,用此菌液皮下注射18~22 g小鼠5只,0.1 ml/只,24~36 h内4只小鼠先后死亡,并从死亡的5只小鼠中回收到致病性大肠杆菌,培养特性和镜检形态与从病死兔中分离的菌株一致。而对照组2只小鼠7天后仍健活。分别取12只病死兔的肝、脾、肺和肾各小许,混合称重,用组织捣碎机捣碎,按1∶10加入灭菌生理盐水制成悬液,经3 000 r/min离心20 min,取上清液加入青霉素、链霉素各1 000 IU(μg)/ml,置4℃冰箱内作用4 h,然后用细菌滤器过滤,取滤液皮下注射2只体重2 kg左右的健康兔,1 ml/只。同时吸取滤液0.5 ml接种于肉汤培养基中,37℃培养48 h,结果为阴性。注射病料滤液后的兔只,在40~72 h内先后死亡,并现兔瘟典型的临床症状及病理变化。取肝、脾接种于鲜血琼脂平板及麦康凯平板,37℃温箱培养48 h,结果均无任何细菌生长。
(5)以剖检的12只病死兔的肝、脾、肺和肾等病料以及2只由上述实验中发病死亡兔的肝、脾、肺和肾制备14份1∶10悬液,分别以1%人的“O”型红细胞作血凝试验,结果14份被检样本均呈明显凝集,为阳性反应。试验中同时设立正常兔的肝、脾提取物作阴性对照。
(6)取经生化试验鉴定的大肠杆菌纯培养物,用扩散法,使用杭州天和微生物试剂有限公司生产的药敏纸片,在普通琼脂平板上进行药敏感试验,结果筛选出高敏药物为头孢唑啉和恩诺沙星;中度敏感药物为氟哌酸和丁胺卡那霉素。
5 防治措施
(1)隔离发病兔只,在远离兔场的地方加强力消毒灵、深埋病死兔只,用1∶500的强力消毒灵对兔舍环境、地面、笼具、用具、饲槽等进行全面彻底消毒。
(2)用该场病死兔的肝、脾、肺等组织制成的兔瘟组织灭活苗和以该场分离的菌株制备的大肠杆菌灭活苗,对该场的兔群进行紧急免疫接种,20~30日龄的仔兔,每只皮下注射大肠杆菌灭活苗1ml;30日龄以上的大、小兔每只皮下注射兔瘟组织灭活苗和大肠杆菌灭活苗各2 ml。
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